在药物研发的众多靶点中,有一些相互作用的蛋白可以利用蛋白之间的结合特性从而开发相互结合的检测体系,如下面几种方法。
HTRF Assay
利用HTRF将带不同标签的蛋白和带Eu的抗体和带XL665的抗体进行作用,当Eu和XL665的作用距离小于10nM时会发生能量转移。Eu由320nM激发产生的615nM发射光能量会转移到XL665 acceptor上从而检测到相应的665nM信号。例如以下实验:
SOS1:KRAS(G12C) binding assay
PD1:PDL1 binding assay
PDL1:PDL1 binding assay
报告基因方法
当两个蛋白在细胞表面结合后引发下游报告基因信号通路变化时,可利用报告基因方法进行功能检测,如PD1:PDL1 NFAT assay。
蛋白与小分子结合FP实验
将小分子探针(化合物,多肽,核酸等)进行荧光标记,蛋白与探针结合后会导致分子自旋发生变化,从而检测到FP值的变化。如:
PDE4A1A FP assay
PDE4B1 FP assay
PDE4B2 FP assay
PDE4D2 FP assay
以下为各实验对应的阳参数据: